中华人民共和国农业行业标准
NY/T 3902-2021
水果、蔬菜及其制品中 *** 糖、半乳糖、葡萄糖、果糖、麦芽糖
和蔗糖的测定 离子色谱法
前言
本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件由农业农村部乡村产业发展司提出。
本文件由农业农村部农产品加工标准化技术委员会归口。
本文件起草单位：中国农业大学、中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、赛默飞世尔科技（中国）有限公司、青岛盛瀚色谱技术有限公司。
本文件主要起草人：徐贞贞、陈芳、王雪、廖小军、高立红、朱新勇、王冰峰、樊永蓉。
1范围
本文件规定了水果、蔬菜及其制品中 *** 糖、半乳糖、葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖的测定 *** 。
本文件适用于水果蔬菜及其制品中 *** 糖、半乳糖、葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖的含量测定，不适用于脂肪含量大于10%的水果、蔬菜及其制品中的 *** 糖、半乳糖、葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖含量的测定。
本文件 *** 糖、半乳糖、葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖的定量限见附录A。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的现范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验 ***
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4原理
水果、蔬菜及其制品中的 *** 糖、半乳糖、葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖经水提取后离子色谱法测定，以氢氧化钠溶液为淋洗液、阴离子交换分离、脉冲安培检测器检测，以色谱峰保留时间定性，外标法定量。
5试剂和材料
除非另有说明，本 *** 所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
5.1 试剂
氢氧化钠溶液（50%）：色谱纯，离子色谱专用。
5.2试剂配制
氢氧化钠溶液（200mmol/L）：称取10.4mL氢氧化钠溶液（5.1），用预先脱气的水稀释并定容至1 000 mL，惰性气体保护。
5.3标准品
5.3. 1 *** 糖（C5H10O5，CAS号：5329-37-0）：纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
5.3.2半乳糖（C6H12O6，CAS号：59-23-4）：纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
5.3.3葡萄糖（C6H12O6，CAS号：50-99-7）：纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
5.3.4果糖（C6H12O6，CAS号：57-48-7）：纯度≥99% ，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
5.3.5麦芽糖（C12strong4O12，CAS号：6363-53-7）：纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
5.3.6蔗糖（C12strong2O12，CAS号：57-50-1）：纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
5.4标准溶液的配制
5.4.1标准储备液（10mg/mL）：分别准确称取经过（96±2）℃干燥2 h的 *** 糖、半乳糖、葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖各1.000 g于100 mL容量瓶中，用水溶解并定容至刻度。置于4℃密封保存，有效期一个月。
5.4.2标准工作液（1.0mg/mL）：分别吸取1.0mL *** 糖、半乳糖、葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖标准储备液（5.4.1）于10mL容量瓶中，用水稀释定容至刻度，配制浓度为1.0mg/mL标准工作液，临用现配。
5.4.3混合系列标准工作液：准确吸取标准工作液（5.4.2）适量，用水稀释得到浓度分别为0.5mg/L、1.0 mg/L、5.0 mg/L、8.0 mg/L、10.0 mg/L、12.0 mg/L、15.0 mg/L的 *** 糖、半乳糖、葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖的混合系列标准工作溶液，临用现配。
注：可根据试样中 *** 糖、半乳糖、葡萄糖果糖、麦芽糖和蔗糖的种类与浓度调整混合工作液的组成及浓度范围。
5.5材料
5.5. 1水性滤膜针式过滤器：0.22μm和0.45μm。
5.5.2定性快速滤纸。
6仪器设备
6.1离子色谱仪：配有梯度泵，脉冲安培检测器，Au工作电极。
6.2分析天平：感量 0.01 g~0. 0001 g。
6.3涡旋振荡器。
6.4 离心机：转速不低于9500 r/min。
6.5组织捣碎机。
6.6 样品粉碎机。
6.7超声波提取仪。
6.8电热恒温鼓风干燥箱。
7样品
7.1 试样制备
取适量有代表性的样品，液态均匀样品直接摇匀，固态非均匀样品切碎后匀浆混匀。
7.2 提取净化
称取试样1.00g（干制样品称取0.10g），准确加入50mL水，涡旋混匀10min，超声30min后，9000r/min离心10min，移取上清液。将前述上清液经定性快速滤纸粗过滤后，依次过0.45μm和0.22μm的针式过滤器过滤得到待测样品，同时做空白试验。
注：试样中糖含量超出工作曲线浓度时，应选择适当的稀释倍数，以水稀释。
8分析步骤
8.1离子色谱条件设置
a） 色谱柱：PA20 型阴离子分离柱（3mm×150mm）和PA20型保护柱（3mm×30mm），或等效色谱柱；
b） 淋洗液A：水；
c） 淋洗液B：氢氧化钠溶液（200 mmol/L）；
d） 柱温：30℃；
e） 流速：0.4mL/min；
f） 进样量：10μL；
g） 工作电极：Au电极；
h） 参比电极：Ag/AgCl参比电极；
i） 检测池温度：30℃；
j） 洗脱条件见表1。
表1流动程序
时间min | 流动相A% | 流动性B% |
0.00 | 95 | 5 |
20 | 95 | 5 |
20.1 | 80 | 20 |
30 | 80 | 20 |
30.1 | 0 | 100 |
40 | 0 | 100 |
40.1 | 95 | 5 |
50 | 95 | 5 |
8.2标准工作曲线绘制
按照8.1设定的色谱工作条件，待仪器稳定后，依次测定混合系列标准工作液（5.4.3）中 *** 糖、半乳糖、葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖的色谱峰面积。根据混合系列标准工作液（5.4.3）中 *** 糖、半乳糖、葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖的浓度与相应峰面积绘制 *** 糖、半乳糖、葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖的浓度色谱峰面积标准曲线，标准品色谱图见附录B中的图B.1。
8.3试样溶液测定
将试样溶液按照8.1设定的色谱工作条件进行测定，根据保留时间定性，根据标准曲线得到试样中糖的浓度，同时测定试剂空白试验。
9结果计算和表述
试样中 *** 糖、半乳糖、葡萄糖、果糖、麦芽糖或蔗糖含量Xi以质量分数计，单位为克每千克（g/kg），按公式（1）计算。
式中：
Xi——试样中 *** 糖、半乳糖、葡萄糖、蔗糖、果糖或麦芽糖的含量数值，单位为克每千克（g/kg）；
C——试样溶液中 *** 糖、半乳糖、葡萄糖、蔗糖、果糖和麦芽糖的浓度数值，单位为毫克每升（mg/L）；
C0——试剂空白中 *** 糖、半乳糖、葡萄糖、蔗糖、果糖和麦芽糖的浓度数值，单位为毫克每升（mg/L）；
V——提取液体积数值，单位为毫升（mL）；
f——试样溶液稀释倍数；
m——试样的质量数值，单位为克（g）；
1 000——换算系数。
*** 糖、半乳糖、葡萄糖、蔗糖、果糖或麦芽糖的含量≥1g/kg时，计算结果保留3位有效数字； *** 糖、半乳糖、葡萄糖、蔗糖、果糖或麦芽糖的含量＜1 g/kg 时，计算结果保留2位有效数字。
10 精密度
在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10%。
11其他
当称样量为1.00g（干制样品为0.10g）时，本文件水果、蔬菜及其制品中 *** 糖、半乳糖、葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖的样品检出限和样品定量限见附录A。
转载自：http://www.xpl-hplc.com/enstyle/articleinfo_11758760.html
麦芽糖醇 | 585-88-6 | 瑞威尔生物科技中文名 | 麦芽糖醇 |
中文同义 | 麦芽糖醇;4-O-alpha-吡喃葡萄糖基-D-山梨糖醇;麦芽糖醇 标准品;麦芽糖醇厂家;麦芽糖醇作用;麦芽糖醇用途;麦芽糖醇价格;食品级麦芽糖醇 |
英文名 | Maltitol |
英文同义 | 4-O-.alpha.-D-GlucopyronosylD-sorbitol;GLUCITOL,4-O-ALPHA-D-GLUCOPYRANOSYL,D-;MALTITOLSYRUP;MALTITOL-BASEDPRODUCTS;4-o-alpha-d-glucopyranosyl-d-glucito;amaltisyrup;amaltymr100;d-4-o-alpha-d-glucopyranosylglucitol |
CAS | 585-88-6 |
分子式 | C12strong4O11 |
分子量 | 344.31 |
EINECS | 209-567-0 |
结构式 | |
性质 | |
熔点 | 149-152 °C(lit.) |
比旋光度 | <α>D20 +106～+108゜ (c=0.8, strongO) |
沸点 | 399.42°C (rough estimate) |
密度 | 1.3863 (rough estimate) |
折射率 | 105 ° (C=10, strongO) |
储存条件 | 2-8°C |
溶解度 | Very soluble in water, practically insoluble in anhydrous ethanol. |
酸度系数(pKa) | 12.84±0.70(Predicted) |
形态 | Crystalline Powder |
颜色 | White |
水溶解性 | Soluble in water. Slightly soluble in ethanol. |
BRN | 89983 |
EPA化学物质信息 | D-Glucitol, 4-O-.alpha.-D-glucopyranosyl- (585-88-6) |
本公司的所有产品仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。
非药用物品进口流程稳建报关 杨少明
非药用物品的进口一直是多数医疗设备企业的难点，医疗设备测试需要用到非药用物品测试设备的各种性能，但是非药用物品进口的监管非常严格，涉及监管部门和办理证件让多数企业无从下手，稳建报关根据多年服务经验整理如下非药用物品进口流程供多数企业参考。
一、政策：
关于进口药品目录中非药用物品进口通关有关事宜的通告国食药监注<2004>62号
我局和海关总署联合颁发的《药品进口管理办法》已于2004年1月1日起施行。根据《药品进口管理办法》的规定，列入《进口药品目录》的物品必须办理《进口药品通关单》。2003年12月30日我局会同海关总署制定了《进口药品目录》，由于该目录是按照商品税则的分类和编制方式制定的，致使有些食用原、辅料和药品合成前体也按照药品管理，即该类物品进口时，需出具《进口药品通关单》。为方便非药用物品的通关，规范口岸管理，现将有关事宜通告如下：
一、我局将非药用类物品进行汇总，现予以公布（详见附件）。凡列入此目录中的物品，进口单位可凭营业执照复印件、装箱单、提运单等资料，直接到口岸药品监督管理局办理《进口药品通关单》。口岸药品监督管理局应在《进口药品通关单》中注明“非药用，不需进行药品口岸检验”。
尚未包含在附件中的非药用物品，进口单位应向我局提出进口申请，各口岸药品监督管理局凭我局的批准文件办理《进口药品通关单》。我局将定期公布新增的非药用物品目录。
二、进口检验用对照品、标准品，应凭我局批准的《进口药品批件》向口岸药品监督管理局申请办理《进口药品通关单》。
办理《进口药品批件》，申请人应于对照品、标准品进口前60天，填写《进口药品批件申请表》，并报送注册证复印件、所进样品的用途、营业执照复印件等资料，向我局提出申请。
特殊情况下，申请人可填写《进口药品报验单》，报送注册证复印件、所进样品的用途、营业执照复印件等资料，迳向我局申请办理《进口药品通关单》。我局自收到申请资料之日起，3日内办理完毕。
国家食品药品监督管理局 二○○四年三月十六日
二、报检资料准备
（一）非药用物品报验（在非药用物品目录内的化学品，非药用物品目录见附件。）
（1）生产厂出具的检验报告书；
（2）原产地证明；
（3）购货合同、装箱单、提运单和货运发票；
（4）报验单位营业执照；
（5）收货单位营业执照；
（6）存货地点的营业执照。
注：
1、经其他国家或者地区转口的进口药品，需要同时提交从原产地到各转口地的全部购货合同、装箱单、提运单和货运发票等；
2、不在非药用物品目录内的（见附件），另需提供国家药品监督管理局相关批件
3、以上材料复印件加盖申报单位公章后，在“中国国际贸易单一窗口”进口药品通关单备案申请附件里提交电子版本；
4、现场办理“药品进口通关单”时需提交进口报验单原件和上述材料加盖申报单位公章的复印件。
附件：非药用物品目录
国食药监注<2004>62号 关于进口药品目录中之一批非药用物品目录的通告
一、食品添加剂类：
固体麦芽糖醇、液体麦芽糖醇、异麦芽糖醇、乙酰异丁酸蔗糖酯、异麦芽酮糖醇、木糖醇、乳糖醇。
二、药品合成前体：
头孢呋辛酸、7-苯乙酰胺基-3-氯甲基-3-头孢烷酸-P-甲氧苄基酯（GCLE）、头孢唑啉酸、头孢噻肟酸。
国食药监注<2005>11号 关于进口药品目录中第二批非药用物品目录的通告
一、食品添加剂类：
异麦芽酮糖。
二、药品合成前体：
羟基苯甘氨酸、四乙酰核糖、7-ANCA、 *** 头孢吡肟、头孢匹胺酸、头孢地嗪酸。
三、其它：
褪黑素、胆碱甲酸酯、3-O-甲氧基甲基-16，17-O-硫酰基-16-表雌三醇。
国食药监注<2005>423号 关于进口药品目录中第三批非药用物品目录的通告
一、食品添加剂类
海藻糖。
二、药品合成前体
7-氨基-3-氯-3-头孢环-4-羧酸（7-ACCA）、7-氨基-3-乙烯基-3-头孢环-4-羧酸（7-AVCA）、头孢米诺酸、头孢克肟甲酯(Cefixime Methyl Ester)。
三、其它
琼脂糖、酵母多聚糖(Yeast Polysaccharide)、丙氧基酰化葡萄糖（Glucam E-20）、苯并咪唑、8-氮鸟嘌呤、硫脲嘧啶、2-噻唑丙氨酸、L-核糖（L-Ribose）。
主要试剂配制
（1）50×TAEBuffer(pH8.5)：调节pH值至8.5，定容至1L，室温保存。
（2）LB液体培养基（800mL）：称量8g氯化钠，4g酵母提取物和8g胰蛋白胨，加入去离子水，定容至800mL，高温高压蒸汽灭菌30分钟，置于4℃冰箱保存。
（3）抗生素Ampicillin：称量1g的Ampicillin粉末，加入一定量的灭菌超纯水，充分混匀溶解，定容至10mL，然后在超净台工作，用0.22μm过滤器过滤除菌，分装，-20℃冰箱保存。
（4）IPTG诱导剂：称量1g的IPTG粉末，加入一定量已灭菌的超纯水，充分混匀溶解，定容至10mL，然后在超净台工作，用0.22μm过滤器过滤除菌，分装，-20℃冰箱保存备用。
（5）PBS缓冲溶液：分别称量氯化钾0.2g，磷酸二氢钾0.2g，磷酸氢二钠2.08g，氯化钠8.0g，加入一定量的超纯水，使其充分搅拌溶解，定容至1L，高温高压蒸汽灭菌30分钟。
（6）Columnbuffer：20mL1M的Tris-HCl，11.7gNaCl，2mL0.5M的EDTA，用超纯水定容至1L。
（7）Elutionbuffer：10mM麦芽糖加入到Columnbuffer中。
（8）考马斯亮蓝R-250染色液：称量0.5g考马斯亮蓝R-250粉末并放置于烧杯中，添加250mL的异丙醇。
（9）5×Tris-甘氨酸缓冲液：称取Tris15.5g，SDS5g，甘氨酸93.825g，溶于800mL超纯水中，定容至1L，实验前用超纯水将其稀释成1×备用。
（10）1.5mol/LTris（pH8.8）1.3mL，10%SDS0.02mL，10%过 *** 铵0.02mL，TEMED0.002mL，上下颠倒充分混匀。
原核表达重组质粒的构建
（1）利用生物软件Primer5.0设计PCR引物，并分别在上游引物5'端和下游引物3'端加酶切位点和pMal-c2X-NAP-S1、pMal-c2X-NAP-S2、pMal-c2X-NAP-S3和pMal-c2X-NAP-S4的基因PCR扩增所用引物见表。
以本实验室保存的重组质粒pET-24b-NAP为模板，分别按照常规PCR条件扩增NAP基因及S1、S2、S3、S4基因。在冰上配制PCR体系，混合均匀，离心，然后进行PCR操作。
在每个扩增的目的基因片段反应液中，取出5μL的PCR扩增产物，同时利用DNA产物纯化试剂盒对PCR反应扩增得到的产物进行产物纯化。
PCR扩增产物经过1%的琼脂糖凝胶电泳，验证后纯化PCR扩增产物。根据PCR产物纯化试剂盒将PCR产物纯化。利用PCR，采用目的基因NAP的上游引物及S1、S2、S3、S4的下游引物，以纯化的产物为模板。
将PCR产物进行凝胶电泳检测，对目的条带进行割胶回收，使用胶回收试剂盒胶回收NAP-S1、NAP-S2、NAP-S3、NAP-S4基因PCR产物。
培养：加入700μL的LB液体培养基（已预热至42℃），37℃、200rpm，振荡培养50分钟。涂布：3000rpm、3分钟离心浓缩菌体，弃上清至剩余液体200μL，重悬混匀，将其菌液均匀涂布于含Amp的LB平板上，37℃培养箱倒置培养16小时。
第二天，观察平板上的克隆情况，平板置于4℃冰箱保存。接种环挑取单菌落到加入3mL含有Amp的LB液体培养基的5mLEP管中，将其置于37℃的摇床上，转速150rpm，震荡培养6h，进行菌落PCR验证。PCR反应完成后用1％的琼脂糖凝胶电泳检测，选取有特异性条带的单菌落菌液进行后续验证。
选取菌落PCR验证正确的单菌落菌液，取70μL加入7mL含有Amp的LB液体培养基中，置于摇床中振荡培养过夜。按照说明书步骤，提质粒进行双酶切。双酶切体系置于37℃水浴锅中酶切3-6h，酶切完成后用1%的琼脂糖凝胶电泳验证。
参考Axygen质粒小提试剂盒说明书，提取空质粒pMal-c2X。
①提前一晚，挑取单克隆，添加千分之一Amp，在LB液体培养基中进行摇菌培养，37℃，200rpm，14h。
②移液枪共吸取5mL的菌液进行离心收集菌体，12000×g，1分钟，离心后弃上清。
③取置于4℃的试剂S1250μL，重悬菌体，吹打均匀，使其无块状菌体。
④加入试剂盒中试剂S2300μL，轻轻上下颠倒6-8次，裂解菌体3分钟。
⑤加入350μL的试剂盒中试剂S3，轻轻上下颠倒数次，然后离心12000×g，10分钟。
⑥小心吸取上清，转移至SpinColumn中，套入至2mL的离心管，离心12000×g，1分钟，弃滤液。
⑦移液枪吸取500μL的试剂W1加入SpinColumn内，12000×g，1分钟离心，弃去滤液。
⑧移液枪吸取700μL的试剂WashBufferW2加入SpinColumn内，12000×g，1分钟离心，弃去滤液。重复该步骤。
⑨12000×g，1分钟离心，然后将SpinColumn转入新的1.5mL离心管内，开盖静置5分钟，挥发乙醇，不宜时间过长，防止DNA遭到损坏。
⑩移液枪吸取40μL已经60℃预热的灭菌超纯水添加在SpinColumn滤膜中央处，室温静置2分钟，12000×g，1分钟离心洗脱。最终得到质粒，超微量核酸蛋白仪测定其质粒浓度，-20℃保存备用。
T4DNA连接酶和连接酶Buffer放置于冰上，向EP管中加入ddstrongO、双酶切产物载体pMal-c2X和NAP-S1、NAP-S2、NAP-S3、NAP-S4基因，混匀，置于42℃水浴5分钟后，置于冰上，再加入T4DNA连接酶和连接酶Buffer，置于16℃条件下连接过夜。
连接后第二天进行转化， *** 同上。
转化后第二天进行菌落PCR鉴定， *** 同上。将鉴定正确的菌扩大培养并提质粒。
取上述步骤中提取的重组表达质粒pMal-c2X-NAP-S1、pMal-c2X-NAP-S2、pMal-c2X-NAP-S3、pMal-c2X-NAP-S4进行SalI和EcoRI双酶切鉴定。将双酶切体系置于37℃水浴2h。加入2μL10×LoadingBuffer后，进行1％的琼脂糖凝胶电泳检测。
将双酶切鉴定正确的pMal-c2X-NAP-S1、pMal-c2X-NAP-S2、pMal-c2X-NAP-S3、pMal-c2X-NAP-S4质粒送至金唯智有限公司进行测序，使用BLAST（http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/）比对测序结果，Chromas分析基因序列单峰图谱。
融合蛋白rMBP-NAP-S的诱导表达及鉴定
（1）将测序正确的阳性重组质粒pMal-c2X-NAP-S1、pMal-c2X-NAP-S2、pMal-c2X-NAP-S3、pMal-c2X-NAP-S4分别转化至原核表达菌株E.coliBL21中。
（2）接种环挑取单克隆菌到含Amp的LB液体内培养，200×g，37℃过夜振荡培养。
（3）第二天以1：100比例接种于含有Amp的LB培养基，200×g，37℃进行扩大培养。利用分光光度计检测菌液OD600值。
（4）当其OD600达到0.6对数生长期，加入已配好的诱导剂IPTG进行诱导处理，使其诱导剂的终浓度为0.4mmol/L。200×g，37℃诱导培养4小时。
（5）9000×g，5min离心菌液，可溶性平衡缓冲液重悬沉淀，收集菌体，-20℃保存。
另外以E.coliBL21（DE3）和pET24b空质粒作为阴性对照。SDS-LoadingBuffer处理样品，12%SDS-PAGE蛋白电泳分析其融合蛋白表达情况。
融合蛋白rMBP-NAP-S的表达形式与纯化分析
（1）挑取单克隆菌接种，200×g，37℃在含有Amp的LB液体培养基过夜振荡培养。
（2）第二天以1：100比例接种于含Amp的800mLLB液体培养基中，200×g，37℃进行扩大培养约3小时。当其OD600达到0.6对数生长期，加入已配好的诱导剂IPTG进行诱导处理，使其诱导剂的终浓度为0.4mmol/L。200×g，37℃诱导培养4小时。
（3）收集菌体：分装诱导表达后的菌液，离心弃上清，收集沉淀，加入适量已配好的Columnbuffer重悬菌体。
（4）超声破碎，设置超声细胞破碎仪的功率为150W，超声3秒，间歇3秒，共超声20分钟，其中每超声3分钟，冰浴2分钟，防止超声过热使蛋白变性，超声破碎完成，冻存于-20℃。
（5）表达形式分析，将超声破碎后的溶液进行低温离心，分别收集上清和沉淀，SDS-LoadingBuffer处理样品。制备10%SDS-PAGE蛋白胶，90V电泳，分析融合蛋白表达形式。
（6）用8倍柱体积的Columnbuffer平衡蛋白亲和层析柱，加入菌液上清并使其匀速流出，用12倍柱体积的Columnbuffer清洗柱子，以洗去与柱子不结合的杂蛋白。用Elutionbuffer洗脱目的蛋白，洗脱过程中使用考马斯亮蓝G-250检测蛋白含量，洗脱至考马斯亮蓝G-250溶液不变色为止。收集纯化产物，SDS-LoadingBuffer处理样品。制备10%SDS-PAGE蛋白胶，90V电泳，检测蛋白纯化结果。
融合蛋白rMBP-NAP-S透析浓缩
（1）经过SDS-PAGE鉴定正确后，将所得蛋白置于处理好的透析袋中，两端用细线系紧以防蛋白外漏，于PBS中4°C过夜透析。
（2）将变色硅胶置于微波炉中烘干使其充分干燥，把透析好的蛋白连同透析袋一起放在变色硅胶中，置于4°C密封过夜，透析结束后将蛋白转移至干净的离心管保存。
融合蛋白rMBP-NAP-S去除内毒素和浓度测定
实验具体 *** 参考厦门EtEraserTMHP内毒素去除试剂盒说明书和SolarbioBCA蛋白浓度检测试剂盒说明书。
（1）蛋白样品的处理。在蛋白样品上样前使用0.45μm的滤膜过滤处理蛋白溶液。
（2）活化柱子内交联的琼脂糖凝胶。组装完实验仪器后，添加试剂盒内已预冷的再生缓冲液至柱子内部进行活化，控制流速缓慢流出，每次添加5mL的缓冲液，一共三次。
（3）平衡亲和树脂。添加试剂盒内已预冷的平衡缓冲液，控制流速缓慢流出，每次添加6mL的缓冲液，一共三次。
（4）上蛋白样品。添加已预冷的蛋白溶液，控制流速缓慢流出，收集流出液。柱子使用保存液保存于4℃冰箱。
（5）配制BCA工作液和蛋白样品稀释。工作液应充分混匀，减少误差，蛋白样品取5倍和10倍进行稀释。
（6）标准品稀释作标准曲线。将标准品按照0、50、100、150、200、300、400、500ng/uL进行操作处理。
（7）孵育和读数。37℃培养箱孵育30分钟，酶标仪读取A562nm的数值，作出标准曲线从而计算得出蛋白样品的浓度。
参考文献
<1>Spagnolo,F.and P.Queirolo,Upcoming strategies for the treatment of metastatic melanoma.Arch Dermatol Res,2012.304(3):p.177-84.
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威士忌酒版收藏基础分类知识威士忌酒的分类 *** 从各个维度上讲有很多，按威士忌酒使用的原料不同，威士忌酒可分为纯麦威士忌酒和谷物威士忌酒以及黑麦威士忌等；按照威士忌酒在橡木桶的贮存时间，它可分为数年到数十年等不同年限的品种；根据酒精度，威士忌酒可分为40-60度等不同酒精度的威士忌酒；最著名也更具代表性的威士忌分类 *** 是依照生产地和国家的不同可将威士忌酒分为苏格兰威士忌酒、爱尔兰威士忌酒、美国威士忌酒和加拿大威士忌酒四大类。其中尤以苏格兰威士忌酒最为著名。
（一）苏格兰威士忌(Scotch Whisky)
苏格兰Scotch生产威士忌酒已有500年的历史，其产品有独特的风格，色泽棕黄带红，清澈透明，气味焦香，带有一定的烟熏味，具有浓厚的苏格兰乡土气息。苏格兰威士忌具有口感干冽、醇厚、劲足、圆润、绵柔的特点，是世界上更好的威士忌酒之一。衡量苏格兰威士忌的主要标准是嗅觉感受，即酒香气味。苏格兰威士忌可分为纯麦威士忌、谷物威士忌和混合威士忌三种类型。目前，世界更流行，产量更大、也是品牌最多的便是混合威士忌。苏格兰混合威士忌的原料百分之六十来自谷物威士忌，其余则加入麦芽威士忌．苏格兰威士忌受英国法律限制：凡是在苏格兰酿造和混合的威士忌，才可称为苏格兰威士忌。它的工艺特征是使用当地的泥煤为燃料烘干麦芽，再粉碎、蒸煮、糖化，发酵后再经壶式蒸馏器蒸馏，产生70℃左右的无色威士忌，再装入内部烤焦的橡木桶内，贮藏上五年甚至更长一些时间。其中有很多品牌的威士忌酝藏期超过了十年。最后经勾兑混配后调制成酒精含量在40℃左右的成品出厂。
苏格兰威士忌酒之所以世界著名的原因是：
1，苏格兰著名的威士忌酒产地的气候与地理条件适宜农作物大麦的生长；
2，在这些地方蕴藏着一种称为泥煤的煤炭，这种煤炭在燃烧时会发出阵阵特有的烟熏气味，泥煤是当地特有的苔藓类植物经过长期腐化和炭化形成的，在苏格兰 *** 威士忌酒的传统工艺中要求必须使用这种泥煤来烘烤麦芽。因此，苏格兰威士忌酒的特点之一就是具有独特的泥煤熏烤芳香味。
3，苏格兰蕴藏着丰富的优质矿泉水，为酒液的稀释勾兑奠定了基础。最后一点是，苏格兰人有着传统的酿造工艺及严谨的质量管理 *** 。
在整个苏格兰有四个主要威士忌酒产区，即：北部高地(Highland)、南部的低地 (Lowland)、西南部的康贝镇(Campbeltown)和西部岛屿伊莱(Islay)。北部高地产区约有近百家纯麦芽威士忌酒厂，占苏格兰酒厂总数的70％以上，是苏格兰最著名的威士忌酒生产区。该地区生产的纯麦芽威士忌酒酒体轻盈，酒味醇香。
南部低地约有10家左右的纯麦芽威士忌酒厂。该地区是苏格兰第二个著名的威士忌酒的生产区。它除了生产麦芽威士忌酒外，还生产混合威士忌酒。
西南部的康贝镇位于苏格兰南部，是苏格兰传统威士忌酒的生产区。
西部岛屿伊莱风景秀丽，位于大西洋中。伊莱岛在酿制威士忌酒方面有着悠久的历史，生产的威士忌酒有独特的味道和香气，其混合威士忌酒比较著名。
苏格兰威士忌品种繁多，按原料和酿造 *** 不同，可分为三大类：纯麦芽威士忌、谷物威士忌和兑合威士忌。
1.纯麦芽威士忌（Pule malt Whisky）
只用大麦作原料酿制而成的蒸馏酒叫纯麦芽威士忌。纯麦芽威士忌是以在露天泥煤上烘烤的大麦芽为原料，用罐式蒸馏器蒸馏，一般经过两次蒸馏，蒸馏后所获酒液的酒精度达 63.4度，入特制的炭烧过的橡木桶中陈酿，装瓶前用水稀释．此酒具有泥煤所产生的丰富香味。按规定，陈酿时间至少三年，一般陈酿五年以上的酒就可以饮用，陈酿七年至八年的酒为成品酒，陈酿十年至二十年的酒为更优质酒。而陈酿二十年以上的酒，其自身的质量会有所下降。纯麦芽威士忌深受苏格兰人喜爱，但由于味道过于浓烈，所以只有10%直接销售，其余约90%的作为勾兑混合威士忌酒时的原酒使用。所以很少外销。著名品牌有：
2.谷物威士忌（Grain Whisky）
谷物威士忌采用多种谷物作为酿酒的原料，如燕麦、黑麦、大麦、小麦、玉米等。谷物威士忌只需一次蒸馏，主要以不发芽的大麦为原料，以麦芽为糖化剂生产的，它与其它威士忌酒的区别是大部分大麦不发芽发酵。因为大部分大麦不发芽所以也就不必使用大量的泥煤来烘烤，故成酒后谷物威士忌的泥炭香味也就相应少一些，口味上也就显得柔和细致了许多。谷物威士忌酒主要用于勾兑其他威士忌酒和金酒，市场上很少零售。
3.兑和威士忌（Blended Whisky）
兑和威士忌又称混合威士忌，是指用纯麦芽威士忌和混合威士忌掺兑勾和而成的。兑和是一门技术性很强的工作，威士忌的勾兑掺和是由兑和师掌握的。兑和时，不仅要考虑到纯麦芽威士忌和谷物威士忌酒液的比例，还要考虑到各种勾兑酒液陈酿年龄、产地、口味等其他特性。
兑和工作的之一步是勾兑。勾兑时， *** 只用鼻子嗅，从不用口尝。遇到困惑时，把酒液抹一点在手背上，再仔细嗅别鉴定。第二步是掺和，勾兑好的剂量配方是保密的。按照剂量把不同的品种注入在混合器（或者通过高压喷雾）调匀，然后加入染色剂（多用饴糖），最后入桶陈酿贮存。兑和后的威士忌烟熏味被冲淡，嗅觉上更加诱人，融合了强烈的麦芽及细致的谷物香味，因此畅销世界各地。根据纯麦芽威士忌和谷物威士忌比例的多少，兑和后的威士忌依据其酒液中纯麦芽威士忌酒的含量比例分为普通和高级两种类型。一般来说，纯麦芽威士忌酒用量在50-80%者，为高级兑和威士忌酒；如果谷类威士忌所占比重大，即为普通威士忌酒。
目前整个世界范围内销售的威士忌酒绝大多数都是混合威士忌酒。苏格兰混合威士忌的常见包装容量在700ml—750ml之间，酒精含量在43℃左右。
（二）爱尔兰威士忌(Irish Whiskey)
爱尔兰威士忌酒做为咖啡的伴侣已经被人们相当熟悉，其独特的香味是深受人们所喜爱的主要原因。爱尔兰制造威士忌至少有700年的历史，有些权威人士认为威士忌酒的酿造起源于爱尔兰，以后传到苏格兰。爱尔兰人有很强的民族独立性，就连威士忌酒 Whiskey的写法上也与苏格兰威士忌酒Whisky有所不同。
爱尔兰威士忌酒的生产原料主要有：大麦、燕麦、小麦和黑麦等，以大麦为主，约占80%左右，爱尔兰威士忌酒用塔式蒸馏器经过三次蒸馏，然后入桶老熟陈酿，一般陈酿时间在8-15年，所以成熟度相对较高，装瓶时，为了保证其口味的一惯性还要进行勾兑与掺水稀释。
过去为了逃避高的吓人的酒税，有不少爱尔兰人秘密的私开酒坊，所以人们常称爱尔兰威士忌为“炮厅威士忌”（Poteen Whiskey）（注：“炮厅”是一种小型流动的甑。）
爱尔兰威士忌酒与苏格兰威士忌酒 *** 工艺大致相同，前者较多保留了古老的酿造工艺，麦芽不是用泥炭烘干，而是使用无烟煤。二者最明显的区别是爱尔兰威士忌没有烟熏的焦香味，口味比较绵柔长润。爱尔兰威士忌比较适合 *** 混合酒和与其他饮料掺兑共饮（如爱尔兰咖啡）。国际市场上的爱尔兰威士忌酒的度数在40度左右。
（三）美国威士忌(Ameican Whiskey)
美国是生产威士忌酒的著名国家之一。同时也是世界上更大的威士忌酒消费国，据统计美国成年人每人每年平均饮用16瓶威士忌酒，这是世界任何国家所不能比拟的。虽然美国生产威士忌酒的酿造仅有200多年的历史，但其产品紧跟市场需求，产品类型不断翻新，因此美国威士忌很受人们的欢迎。美国威士忌酒以优质的水、温和的酒质和带有焦黑橡木桶的香味而著名，尤其是美国的Bourbon Whiskey波旁威士忌(又称波本威士忌酒)更是享誉世界。
美国威士忌酒的酿制 *** 没有什么特殊之处，只是所用的谷物原料与其他各类威士忌酒有所区别，蒸馏出的酒酒精纯度也较低。美国西部的宾夕法尼亚州、肯塔基和田纳西地区是制造威士忌的中心。美国威士忌可分为三大类：
1、单纯威士忌（Straight Whiskey）
所用原料为玉米、黑麦、大麦或小麦，酿制过程中不混合其他威士忌酒或者谷类中性酒精，制成后需放入炭熏过的橡木桶中至少陈酿两年。另外，所谓单纯威士忌，并不象苏格兰纯麦芽威士忌那样，只用一种大麦芽制成，而是以某一种谷物为主（一般不得少于 51%）再加入其他原料。单纯威士忌又可以分为四类：
（1）波本威士忌（Bourbon Whiskey）
波旁是美国肯塔基州一个市镇的地名，过去在波旁生产的威士忌酒被人们亲切的称为波旁威士忌，现在成为美国威士忌酒的一个类别的总称。波旁威士忌酒的原料是玉米、大麦等，其中玉米至少占原料用量的51%，最多不超过75%，经过发酵蒸馏后装入新的炭烧橡木桶中陈酿四年，陈酿时间最多不能超过八年，装瓶前要用蒸馏水稀释至43.5度左右才能出品。波旁威士忌酒的酒液呈琥珀色，晶莹透亮，酒香浓郁，口感醇厚、绵柔，回味悠长。其中尤以肯塔基州出产的产品最有名，价格也更高。另外，现在在伊利诺、俄亥俄、宾西法尼亚、田纳西、密苏里、印地安那等州也有生产。
（2） 黑麦威士忌（Rye Whiskey）
也称裸麦威士忌，是用不得少于51%的黑麦及其它谷物酿制而成的，酒液呈琥珀色，味道与波旁威士忌不同，具有较为浓郁的口感，因此不太受现代人的喜爱。主要品牌有：
①Old Overholt老奥弗霍尔德。由创立于1810年的A?奥弗霍尔德公司在宾夕法尼亚州生产，原料中裸麦含量达到59％，并且不掺水的著名裸麦威士忌酒。
②Seagram’s 7 Crown施格兰王冠。由施格兰公司于1934年首次推向市场的口味十足的美国黑麦威士忌。
（3）玉米威士忌（Corn Whiskey）
是用不得少于80%的玉米和其它谷物酿制而成的威士忌酒，酿制完成后用旧炭木桶进行陈酿。主要品牌有：
Platte Valley普莱特·沃雷。由创立于1856年的马科密克公司生产，该酒的酿制原料中玉米原料的比重达到88％，酒度为40度，分为五年陈酿和八年陈酿两种类型。
（4） 保税威士忌（Bottled in bond ）
这是一种纯威士忌，通常是波本威士忌或黑麦威士忌，但它是在美国 *** 监督下制成的， *** 不保证它的品质，只要求至少陈酿4年，酒精纯度在装瓶时为50℃，必须是一个酒厂制造，装瓶厂也为 *** 所监督。
2、 混合威士忌（Blended Whiskey）
这是用一种以上的单一威士忌，以及20%的中性谷类酒精混合而成的威士忌酒，装瓶时，酒度为40℃，常用来作混合饮料的基酒，分为3种：
（1）肯塔基威士忌：是用该州所出的纯威士忌酒和谷类中性酒精混合而成的。
（2）纯混合威士忌：是用两种以上纯威士忌混合而成，但不加中性谷类酒精。
（3）美国混合淡质威士忌：是美国的一个新酒种，用不得多于20%的纯威士忌，和40℃的的淡质威士忌混合而成的。
3、 淡质威士忌（Light Whiskey）
是美国 *** 认可的一种新威士忌酒，蒸馏时酒精纯度高达80.5-94.5度，用旧桶陈年。淡质威士忌所加的50℃的纯威士忌，不得超过20%。
除此之外，在美国还有一种称为Sour-Mash whiskey的，这种酒是用老酵母（即先前发酵物中取出的）加入到要发酵的原料里，（新酵母与老酵母的比例为1：2）进行发酵，然后再蒸馏而成的，用此种发酵 *** 造出的酒酒液比较稳定，多用于波本酒的生产。它是在1789年由Elija Craig发明的。
（四）加拿大威士忌(Canadian Whisky)
加拿大生产威士忌酒已有200多年的历史，其著名产品是稞麦(黑麦)威士忌酒和混合威士忌酒。在稞麦威士忌酒中稞麦(黑麦)是主要原料，占51%以上，再配以大麦芽及其他谷类组成，此酒经发酵、蒸馏、勾兑等工艺，并在白橡木桶中陈酿至少3年(一般达到4-6年),才能出品。该酒口味细腻，酒体轻盈淡雅，酒度40℃以上，特别适宜作为混合酒的基酒使用。加拿大威士忌酒在原料、酿造 *** 及酒体风格等方面与美国威士忌酒比较相似。
（五）其他
日本威士忌属苏格兰威士忌类型。生产 *** 采用苏格兰传统工艺和设备，从英国进口泥炭用于烟熏麦芽，从美国进口白橡木桶用于贮酒，甚至从英国进口一定数量的苏格兰麦芽威士忌原酒，专供勾兑自产的威士忌酒。日本威士忌酒按酒度分级，特级酒含酒精43％（体积），一级酒含酒精40％（体积）以上。
中国威士忌 中国生产威士忌已有多年历史。70年代中期又由轻工业部食品发酵工业科学研究所与工厂协作，从原料加工到生产工艺进行研究，选用中国产泥炭及良种酵母，试制出苏格兰类型的麦芽威士忌、谷物威士忌和勾兑威士忌，酒精含量40％（体积），风味与国际产品近似。
<编辑本段>
5、著名品牌
苏格兰兑和威士忌的主要名牌产品有：
（1）Ballantine’s百龄坛。百龄坛公司创立于1827年，其产品是以产自于苏格兰高地的八家酿酒厂生产的纯麦芽威士忌为主，再配以四十二种其他苏格兰麦芽威士忌，然后与自己公司生产酿制的谷物威士忌进行混合勾兑调制而成。具有口感圆润，浓郁醇香的特点。是世界上更受欢迎的苏格兰兑和威士忌之一。产品有：特醇、金玺、12年、17年、30年等多个品种。
（2）Bell’s金铃。金铃威士忌是英国更受欢迎的威士忌品牌之一，由创立于1825年的贝尔公司生产。其产品都是使用极具平衡感的纯麦芽威士忌为原酒勾兑而成，产品有：Extra Special（标准品）、Bell’s Deluxe(12年)、Bell’s Decanter(20年)、Bell’s Royal Reserve（21年）等多个级别。
（3）Chivas Regal芝华士。芝华士由创立于1801年的Chivas Brothers Ltd.( 芝华士兄弟公司)生产，Chivas Regal的意思是“Chivas家族的王者”，在1843年，Chivas Regal曾作为维多利亚女王的御用酒。产品有：芝华士12年（Chivas Regal 12）、皇家礼炮（Royal Salute）两种规格。
（4）Cutty Sark顺风。又称帆船、魔女紧身衣；诞生于1923年的，具有现代口感的清淡型苏格兰混合威士忌，该酒酒性比较柔和，是国际上比较畅销的苏格兰威士忌之一。该酒采用苏格兰低地纯麦芽威士忌作为原酒与苏格兰高地纯麦芽威士忌勾兑调和而成。产品分为Cutty Sark（标准品）、Berry Sark(10年)、Cutty（12年）、St.James(圣?詹姆斯)等。
（5）Dimple添宝15年。添宝15年（Dimple）是一九 *** 向世界推出的苏格兰混合威士忌，具有金丝的独特瓶型和散发着酿藏十五年的醇香，更显得独具一格，深受上层人士的喜爱。
（6）Grant’s格兰特。是苏格兰纯麦芽威士忌Glenfiddich格兰菲迪（又称鹿谷）的姊妹酒，均由由英国威廉?格兰特父子有限公司出品，Grant’s格兰特牌威士忌酒给人的感觉是爽快和具有男性化的辣味，因此在世界具有较高的知名度。其标准品为Standfast（意为其创始人威廉姆?格兰特常说的一句话“你奋起吧”），另外还有Grant’s Centenary格兰特世纪酒以及Grant’s Royal皇家格兰特（12年陈酿）和Grant’s 21（格兰特21年极品威士忌）等多个品种。
（7）Haig海格。是苏格兰酿制威士忌酒的老店，具有比较高的知名度，其产品有标准品Haig和Pinch(12年陈豪华酒)等。
（8）J&B珍宝。始创于1749年的苏格兰混合威士忌酒，由贾斯泰瑞尼和布鲁克斯有限公司出品，该酒取名于该公司英文名称的字母缩写，属于清淡型混合威士忌酒。该酒采用四十二种不同的麦芽威士忌与谷物威士忌混合勾兑而成，且80％以上的麦芽威士忌产自于苏格兰著名Speyside地区。是目前世界上销量比较大的苏格兰威士忌酒之一。
（9）Johnnie Walker约翰尼?沃克。又称尊尼沃克；约翰尼?沃克（Johnnie Walker）是苏格兰威士忌的代表酒，该酒以产自于苏格兰高地的四十余种麦芽威士忌为原酒，，在混合谷物威士忌勾兑调配而成。Johnnie Walker Red Label（红方或红标）是其标准品，在世界范围内销量都很大；Johnnie Walker Black Label（黑方或黑标）是采用12年陈酿麦芽威士忌调配而成的高级品，具有圆润可口的风味。另外还有Johnnie Walker Blue Label(蓝方或蓝标)是尊尼沃克威士忌酒系列中的顶级醇醪；Johnnie Walker Gold Label(金方或金标)陈酿18年的尊尼沃克威士忌系列酒、Johnnie Walker Swing Superior(尊豪) 尊尼沃克威士忌系列酒中的极品，选用超过四十五种以上的高级麦芽威士忌混合调制而成，口感圆润，喉韵清醇。酒瓶采用不倒翁设计式样，非常独特。 Johnnie Walker Premier(尊爵)属极品级苏格兰威士忌酒,该酒酒质馥郁醇厚,特别适合亚洲人的饮食口味。
（10）Passport帕斯波特。又称护照威士忌；由威廉?隆格摩尔公司于1968年推出的具有现代气息的清淡型威士忌酒，该酒具有明亮轻盈，口感圆润的特点。非常受到年轻人的欢迎。
（11）The Famous Grouse威雀。由创立于1800年的马修?克拉克公司出品。Famous Grouse属于其标准产品，还有Famous Grouse15（15年陈酿）和Famous Grouse21（21年陈酿）等。
此外，比较著名的苏格兰混合威士忌酒还有Claymore (克雷蒙)、Criterion（克利迪欧）、Dewar 笛沃、Dunhill(登喜路)、Hedges & Butler(赫杰斯与波特勒)、 Highland Park (高原骑士)、King of Scots(苏格兰王)、Old Parr（老帕尔）、Old St.Andrews(老圣?安德鲁斯)、Something Special (珍品)、Spey Royal(王者或斯佩?罗伊尔)、Taplows（泰普罗斯）、Teacher’s（提切斯或教师）、White horse （白马）、William Lawson’s（威廉?罗森）等。
（12）Glenfiddich格兰菲迪（又称鹿谷）。由威廉?格兰特父子有限公司出品，该酒厂于一八八七年开始在苏格兰高地地区创立蒸馏酒制造厂，生产威士忌酒，是苏格兰纯麦芽威士忌的典型代表。Glenfiddich 格兰菲迪的特点是味道香浓而油腻，烟熏味浓重突出。品种有8年、10年、12年、18年、21年等。
（13）Glenlivet 兰利斐（又称格兰利菲特）。是由乔治和J.G.史密斯有限公司生产的12年陈酿纯麦芽威士忌，该酒于一八二四年在苏格兰成立，是之一个 *** 登记的蒸馏酒生产厂，因此该酒也被称之为“威士忌之父”。
（14）Macallan 麦卡伦。苏格兰纯麦芽威士忌的主要品牌之一。Macallan的特点是由于在储存、酿造期间，完全只采用雪利酒橡木桶盛装，因此具有白兰地般的水果芬芳，被酿酒界人士评价为“苏格兰纯麦威士忌中的劳斯莱斯”。在陈酿分类上有10年、12年、18年以及25年等多个品种，以酒精含量分类有40度、43度、 57度等多个品种。
另外还有Argyli（阿尔吉利）、Auchentoshan (欧汉特尚)、Berry’s (贝瑞斯)、Burberry’s(巴贝利)、Findlater’s（芬德拉特）、Strathspy(斯特莱斯佩)等多种酒品。
著名的爱尔兰威士忌酒商标与产品有：
1、John Jameson约翰?詹姆森。创立于1780年爱尔兰都柏林，是爱尔兰威士忌酒的代表。其标准品John Jameson 具有口感平润并带有清爽的风味，是世界各地的酒吧常备酒品之一；“Jameson 1780 12年”威士忌酒具有口感十足、甘醇芬芳，是极受人们欢迎的爱尔兰威士忌名酒。
2、Bushmills布什米尔。布什米尔以酒厂名字命名，创立于1784年，该酒以精选大麦制成，生产工艺较复杂，有独特的香味，酒精度为43度。分为 Bushmills、Black Bush、Bushmills Malt(10年)三个级别。
3、Tullamore Dew特拉莫尔露。该酒起名于酒厂名，该酒厂创立于1829年。酒精度为43度。其标签上描绘的狗代表着牧羊犬，是爱尔兰的象征。
美国威士忌主要品牌有：
①Bartts’s巴特斯。宾西法尼亚州生产的传统波旁威士忌酒，分为红标12年、黑标20年和蓝标21年三种产品，酒度均为50.5度。具有甘醇、华丽的口味。
②Four Roses四玫瑰。创立于1888年，容量为710ml，酒度43度。黄牌四玫瑰酒味道温和、气味芳香；黑牌四玫瑰味道香甜浓厚；而“普拉其那”则口感柔和、气味芬芳、香甜。
③Jim Beam吉姆·比姆。又称占边，是创立于1795年的Jim Beam 公司生产的具有代表性的波旁威士忌酒。该酒以发酵过的裸麦、大麦芽、碎玉米为原料蒸馏而成。具有圆润可口香味四溢的特点。分为Jim Beam 占边(酒度为40.3度)、Beam’s Choice精选（酒度为43度）、Barrel-Bonded 为经过长期陈酿的豪华产品。
④Old Taylor老泰勒。由创立于1887年的基?奥尔德?泰勒公司生产，酒度为42℃。该酒陈酿六年，有着浓郁的木桶香味，具有平滑顺畅，圆润可口的特点。
⑤Old Weller老韦勒。由W.C.韦勒公司生产，酒度为53.5℃，陈酿七年，是深具传统风味的波旁威士忌酒。
⑥Sunny Glen桑尼·格兰。桑尼·格兰意为阳光普照的山谷，该酒勾兑调和后，要在白橡木桶中陈酿十二年，具有丰富而且独特的香味，深受波旁酒迷的喜爱，酒度为40℃。
⑦Old Overholt老奥弗霍尔德。由创立于1810年的A?奥弗霍尔德公司在宾夕法尼亚州生产，原料中裸麦含量达到59％，并且不掺水的著名裸麦威士忌酒。
⑧Seagram’s 7 Crown施格兰王冠。由施格兰公司于1934年首次推向市场的口味十足的美国黑麦威士忌。
加拿大威士忌著名的品牌有：
1. Alberta艾伯塔。产自于加拿大Alberta艾伯塔州，分为Premium普瑞米姆和Springs泉水两个类型，酒度均为40℃。具有香醇、清爽的风味。
2. Crown Royal皇冠。是加拿大威士忌酒的超级品，以酒厂名命名。由于1936年英国国王乔治六世在访问加拿大时饮用过这种酒，因此而得名，酒度为40℃。
3. Seagram’s V.O施格兰特酿。以酒厂名字命名。Seagram原为一个家族，该家族热心于 *** 威士忌酒，后来成立酒厂并以施格兰命名。该酒以稞麦和玉米为原料，贮存6年以上，经勾兑而成，酒度为40℃，口味清淡而且平稳顺畅。
此外，还有著名的Canadian Club(加拿大俱乐部)、Velvet(韦勒维特)、Carrington(卡林顿)、Wiser’s(怀瑟斯)、Canadian O.F.C(加拿大O.F.C)等产品。
食品分析与检验复习题
一、单选题
1、用pH计测得的是食品的（ ）
A、总酸度 B、有效酸度 C、挥发酸度 D、真实酸度
2、在30℃测得糖溶液的锤度值为20，相当于标准条件20℃的锤度值为（ ）
A、20 B、20.68 C、19.32 D、19.68
3、以下（ ）是国际食品法典委员会的缩写
A、AOAC B、ISO C、CAC D、OIE
4、测水不溶性灰分时，需用（ ）先溶解总灰分，过滤后，再高温处理。
A、蒸馏水 B、纯净水 C、去离子水 D、矿泉水
5、紫外-可见分光光度计的紫外光源是由（ ）发出的
A、氙灯 B、氘灯 C、钨灯 D、空心阴极管
6、在气相色谱仪中，样品以（ ）形式与流动相结合，进入色谱柱
A、 固体 B、 液体 C、气体 D、半固体
7、测定酸度时，样品处理时需将样品中的( )除去，避免对测定结果的干扰
A、 二氧化碳 B、二氧化硅 C、二氧化氮 D、二氧化硫
8、下列（ ）适合测量黏度较高的流体
A、 毛细管黏度计 B、旋转黏度计 C、滑球黏度计 D、质构仪
9、酸不溶性灰分也是（ ）
A、水溶性灰分 B、水不溶性灰分C、碱溶性灰分D、碱不溶性灰分
10、用凯氏定氮法测得某样品中氮元素的含量为15克，则样品中蛋白质含量推测是（ ）
A、240克 B、140克 C、93.75克 D、160克
11、（ ）测定是糖类定量的基础。
A还原糖 B非还原糖 C葡萄糖 D淀粉
12、直接滴定法在测定还原糖含量时用（ ）作指示剂。
A亚铁氰化钾 B Cu2+的颜色 C硼酸 D次甲基蓝
13、为消除反应产生的红色Cu2O沉淀对滴定的干扰，加入的试剂是（ ）
A铁氰化钾 B亚铁氰化钾 C醋酸铅 D NaOH
14、K2SO4在定氮法中消化过程的作用是( ).
A.催化 B. 显色 C.氧化 D.提高温度
15、凯氏定氮法碱化蒸馏后,用( )作吸收液.
A.硼酸溶液 B.NaOH液 C.萘氏试纸 D.蒸馏水
16、灰分是标示（ ）一项指标。
A 无机成分总量 B 有机成分 C 污染的泥沙和铁、铝等氧化物的总量
17、测定葡萄的总酸度时，其测定结果以（ ）来表示。
A 柠檬酸 B 苹果酸 C 酒石酸
18、用直接滴定法测定食品还原糖含量时，所用标定溶液是（ ）
A、菲林试剂 B、样品 C、葡萄糖 D、酒石酸甲钠
19、高锰酸钾测定食品还原糖含量时，所用标定溶液是（ ）
A、菲林试剂 B、次甲基蓝 C、葡萄糖 D、高锰酸钾
20、用水提取水果中的糖分时，应调节样液至（ ）。
A、酸性 B、中性 C、碱性
二、多选题
1、处理样品的干灰化法需要以下（ ）设备
A、坩埚 B、容量瓶 C、 马福炉 D、称量瓶
2、感官检验的基本味道是指（ ）
A、酸 B、甜 C、 咸 D、苦
3、采用蒸馏法测水分含量时，选用（ ）作为溶剂
A、苯 B、四氯化碳 C、 二甲苯 D、甲苯
4、高效液相色谱的色谱图有（ ）两种类型
A、正相色谱 B、反相色谱 C、 横向色谱 D、纵向色谱
5、食品中的脂类包括（ ）
A、甘油二酸脂 B、甘油三酸脂 C、类脂 D、类醇
6、以下（ ）可用于侧量糖溶液的浓度
A、波美度计 B、锤度计 C、乳稠计 D、折光仪
7、以下液相色谱的检测器的是（ ）
A、光学性质检测器 B、热电池检测器
C、电学和电化学检测器 D、热学性质检测器
8、检测下列（ ）元素时，样品处理不适合用干法消化
A、Ca B、Hg C、As D、Mg
9、食品感官检验室由（ ）组成
A、检验区 B、会议区 C、办公室 D、样品制备区
10、脂类测定最常用的提取剂有（ ）
A、乙醚 B、苯 C、石油醚 D、二甲苯
11、下列（ ）样品应用乙醇作提取剂。
A 白柠檬 B 巧克力 C 饼干 D、面包
12、消化时还可加入（ ）作为催化剂。
A、 *** 钾 B、 *** 铜 C、氧化铜 D、 ***
13、．哪类样品在干燥之前，应加入精制海砂（ ）
A、蔬菜 B、果酱 C、面包 D、肉
14、用乙醚提取脂肪时，不能用的加热 *** 是（ ）。
A电炉加热 B水浴加热 C油浴加热 D电热套加热
15、下面是还原糖的是（ ）
A乳糖 B麦芽糖 C葡萄糖 D蔗糖
16、脂溶性维生素测定前样品需经过（ ）
A皂化 B水洗 C有机溶剂提取 D浓缩
17、直接法测挥发性酸可采用（ ）收集挥发性酸，然后用氢氧化钠滴定
A蒸馏法 B干燥法 C溶剂提取 D真空法
18、紫外可见分光光度计的吸收池有（ ）两种材质
A玻璃 B石英 C水晶 D卤化钠
三、填空题
1、测挥发酸时，要在处理好的样品中加适量磷酸，其作用是
2、用感官检验 *** 区分两个样品之间的差异时，可采用差别检验法中的
或 法。
3、牛奶是否搀假的初步判断，除测定相对密度外，还可测定 。
4、色谱中的两相物质分别是 和
5、紫外-可见分光光度计由 ， ， ， 和 组成
6、气相色谱仪的检测器有 ， ， 三种
7、索氏抽提器由 ， ， 和 组成
8、灰分的测定中 灰分反映其泥沙等的污染程度
9、在食品分析中总糖是指 和 。
10、原子吸收分光光度计的主要结构由 ， ， 和 组成
11、凯氏定氮法是通过对样品总氮量的测定换算出蛋白质的含量，这是因为 _____________________________________________。
12、凯氏定氮法消化过程中strongSO4的作用是_______ ；CuSO4的作用是______________ 。
13、新电极或很久未用的干燥电极，在使用前必须用____________________浸泡__________小时以上，其目的是______________________________。
14、食品中的灰分可分为____________________、__________和____________________。
15、密度是指 ______________________________，相对密度（比重）是指 __________ 。
16、对浓稠态样品，在测定前加精制海砂或无水 *** 钠的作用是_________________。
17、测定还原糖含量时，对提取液中含有的色素、蛋白质、可溶性果胶、淀粉、单宁等影响测定的杂质必须除去，常用的 *** 是__________ ，所用澄清剂有三种：__________，__________，__________。
18、在食品中 *** 元素测定时使用双硫腙的目的是__________。
19、锡的测定中使用抗坏血酸的作用是__________。
四、问答/计算题
1、 精密称取VB12标准品20mg，加水准确稀释至1000ml，将此溶液置厚度为1cm的吸收池中，在l＝361nm处测得其吸光度A为0.414，另有两个试样，一为VB12的原料药，精密称取20mg，加水准确稀释至1000ml，同样在b=1cm，l＝361nm处测得其吸光度A为0.400。一为VB12注射液，精密吸取1.00ml，稀释至10.00ml，同样测得其吸光度为0.518。试分别计算VB12原料药的百分含量和注射液的浓度（mg/ml）。
2、为什么凯式定氮法测定出的食品中蛋白质含量为粗蛋白含量？
3、现抽取双汇集团生产软塑包装的双汇牌火腿肠10公斤（样品批号为2004062518），要求测定粗蛋白含量。
1）某分析检验员称取经搅碎混匀的火腿0.50g于100mL凯氏烧瓶中。请写出此后的样品处理步骤。
2）将消化液冷却后,转入100mL容量瓶中定容. 移取消化稀释液10mL于微量凯氏定氮蒸馏装置的反应管中,用水蒸汽蒸馏,2%硼酸吸收后,馏出液用0.0998mol/L盐酸滴定至终点,消耗盐酸5.12mL.计算该火腿肠中粗蛋白含量。
4、直接滴定法测定食品还原糖含量时，为什么要对酒石酸甲铜溶液进行标定？
5、用直接滴定法测定某厂生产的硬糖的还原糖含量，称取2.000克样品，用适量水溶解后，定容于250mL。吸取碱性酒石酸铜甲、乙液各5.00mL于锥形瓶中，加入10.00mL水，加热沸腾后用上述硬糖溶液滴定至终点耗去9.65mL。已知标定酒石酸甲铜溶液液10.00ml耗去0.1%mg/mL葡萄糖液10.15ml，问该硬糖中还原糖含量为多少？
答案
一、单选题
1.B 2.B 3.C 4.C 5.B 6.C 7.A 8.C 9.B 10.C 11.A 12.D 13.B 14.D 14.A 16.A 17.C 18.B 19.D 20.B
二、多选题
1.AC 2.ABCD 3.CD 4.AB 5.BC 6.BD 7.ACD 8.BC 9.AD 10.AC 11.CD 12.BD 13.BD 14.AC 15.ABC 16.ABCD 17.AC 18.AB
三、填空题
1.使结合态挥发酸游离出
2.单边检验 双边检验
3.乳稠度
4.流动相 固定相
5.光源 单色器 吸收池 检测器 记录系统
6.TCD(热导池检测器) ECD(电子捕获检测器) FID(质量型微分检测器)
7.接收瓶 滤纸筒 抽提管 冷凝管
8.酸不溶性
9.还原糖 在测定条件下能水解为还原性单糖的蔗糖
10.光源 原子化器 分光系统 检测系统
11.一般蛋白质含氮量为16%
12.使有机物脱水、碳化 催化，指示消化终点的到达
13.蒸馏水或0.1mol/L盐酸溶液 24 使玻璃电极球膜表面形成有良好离子交换能力的水化层
14.水溶性灰分 水不溶性灰分 酸不溶性灰分
15.单位体积物质的质量 物质的密度与参考物质的密度在规定条件下的比值
16.防止样品表面结壳焦化，使内部水分蒸发受到阻碍
17.加入澄清剂 中性乙酸铅 乙酸锌-亚铁氰化钾溶液 *** 铜-氢氧化钠溶液
18.使金属离子与其螯合成金属螯合物，用有机溶剂提取分离
19.掩蔽剂
四、回答/计算题
1.96.6% 0.25mol/L
2.因为样品中常含有核算、生物碱、含氮脂类、卟啉以及含氮色素等非蛋白的含氮化合物
3.
1）向凯氏烧瓶中加入研细的 *** 铜、 *** 钾和浓 *** ，轻轻摇匀，安装消化装置，于凯氏烧瓶瓶口放一漏斗，并将其以45°斜支于有小孔的石棉网上，用电炉小火加热，待内容物全部炭化，泡沫停止产生后，加大火力，保持瓶内液体微沸，至瓶内液体呈蓝绿色透明，继续加热30min，停止加热，冷却，向凯氏烧瓶中缓慢加入蒸馏水，冷却
2）8942.08g
4.还原糖在碱性溶液中与 *** 铜的反应并不符合等摩尔关系，不能根据反应式计算出还原糖含量。因此要用已知浓度的还原糖标准溶液标定碱性酒石酸铜溶液，计算还原糖因数
5.0.01315g/100mg
利用HPLC法，如何分析人参炮制品中氨基酸和还原糖含量有何变化？人参（PanaxginsengC.A.Meyer）是我国极具特色的传统中草药，也是现代医药发展中不可或缺的重要原料。人参因其含有人参皂苷、多糖及氨基酸类等多种活性成分，具有抗肿瘤、调节机体免疫力、抗肥胖、抗糖尿病和缓解衰老等多重功效。
此外，还包含多肽、挥发油、脂肪酸、无机盐和维生素等不同类型化合物，亦是其发挥药效的重要物质基础。
在炮制过程中，由鲜人参经加工炮制而成的生晒参、大力参、红参和黑参等，是目前较为常见的人参炮制品。
但值得注意的是，在蒸制和烘干过程中，人参内在成分会发生较为复杂的化学反应，不仅使人参皂苷发生糖苷键断裂和脱水异构化，而且还会促使人参中氨基酸及还原糖发生梅拉德反应（Maillardreaction，MR），即含羰基化合物（人参中的还原糖）与氨基化合物（人参中的氨基酸、多肽和蛋白质等）发生缩合、聚合反应，从而生成多种梅拉德反应产物（Maillardreactionproducts，MRPs）。
为探究人参炮制过程中发生MR的程度，本研究以同一批鲜参加工而来的生晒参、大力参、活性参、红参和黑参五种炮制品为原料，利用HPLC法探究人参不同炮制品中氨基酸和还原糖的含量变化，以期为初步揭示人参加工过程中MRs的产生提供理论参考。
材料与仪器
实验材料
人参炮制所用的鲜人参原料购自于吉林省万良人参市场（吉林，抚松），单根重为80~100g5年生的新鲜人参。其生晒参、大力参、活性参、红参和黑参等炮制品，为实验室自制，其具体加工 *** 和参照标准如下表所示：
实验试剂
色谱级甲醇、乙腈（默克Supelco），购自于西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司；分析级甲醇、乙醇，购自于山东创达化工有限公司（中国，山东）；娃哈哈纯净水，购自于杭州娃哈哈集团有限公司（浙江，杭州）；丙酮、乙醚、苯酚，购自于南京宁康化工有限公司（江苏，南京）浓 *** （98.5%），购自于辽阳禄晟化工有限公司（辽宁，辽阳）。
氨基酸系列标准品：天门冬氨酸（Asp）、谷氨酸（Glu）、丝氨酸（Ser）、甘氨酸（Gly）、组氨酸（His）、精氨酸（Arg）、苏氨酸（Thr）、丙氨酸（Ala）、脯氨酸（Pro）、酪氨酸（Tyr）、缬氨酸（Val）、蛋氨酸（Met）、半胱氨酸（Cys）、异亮氨酸（Ile）、亮氨酸（Leu）、苯丙氨酸（Phe）、赖氨酸（Lys）；氨基酸衍生试剂A和衍生试剂B溶液，色谱级，购自于上海月旭科技股份有限公司；
还原糖系列标准品：鼠李糖（Rha，CAS.6155-35-7）；葡萄糖醛酸（GlcA，CAS.6556-12-3）；麦芽糖（Maltose，CAS.69-79-4）；D-葡萄糖（Glu，CAS.50-99-7）；D-半乳糖（Gal，CAS.59-23-4）； *** 糖（Ara，CAS.10323-20-3），购自于上海抚生实业有限公司。
实验仪器
欧橡（OAK）C949-304不锈钢中药粉碎机，购自于浙江欧橡机械材料有限公司（浙江，杭州）；
TYHD-600超声波清洗机，购自于北京天佑恒达科技限公司（中国，北京）strong500R型台式高速冷冻离心机，购自于湘仪离心机仪器有限公司（湖南，长沙）；
MZMQ蒸汽型高压蒸汽灭菌器，购自于湖南共创医疗设备有限公司（湖南，长沙）；CS-115M烘干法水分测定仪，购自于深圳市冠亚技术科技有限公司（广东，深圳）；
101A-2型电热鼓风干燥箱，购自于爱来宝（济南）生物技术有限公司（山东，济南）；长安科仪恒温水浴锅，购自于北京三二八科学仪器有限公司（中国，北京）；
UV-6100紫外可见分光光度计，购自于上海元析仪器有限公司（中国，上海）；FA2204电子分析天平（0.00001g），购自于上海十砚仪器设备有限公司（中国，上海）；BK-RE-1A型旋转蒸发仪，购自于山东博科（BIOBASE）生物产业有限公司（山东，青岛）；Waterse2695分析型高效液相色谱仪，购自于美国waters公司。
实验 ***
人参不同炮制品中氨基酸成分的含量测定
供试品溶液的制备
精密称取上文中所制得的五种人参炮制品，并利用高速多功能粉碎机粉碎，测定五种炮制品的含水量差异，过40目筛，各取粉末2.0g，加入60mL甲醇，超声提取30min，离心、过滤，将所得残渣再加入60mL纯净水中，在40~55℃温度超声提取30min，重复两次，过滤，合并滤液，减压浓缩后，定容至25mL容量瓶中，备用。
供试品溶液的衍生
将氨基酸衍生试剂A和氨基酸衍生试剂B参照衍生说明书进行操作，先将衍生试剂A和B稀释5倍，然后各取稀释后的衍生试剂A和B100μL，置于试管中，再取上文中的供试品溶液160μL，振荡5~10s使其混合均匀，室温反应60min后，加入正己烷试剂400μL进行萃取，振荡5~10s后，混匀，反应5min后取下层200μL，加入800μL纯净水，混匀，过0.22μm的微孔滤膜，备用。
色谱条件
使用UltimateAminoAcid氨基酸分析专用柱（4.6mm×250mm，5μm）分析五种人参炮制品的氨基酸种类及其含量测定，其色谱条件参照供应商提供的氨基酸分析 *** 所述。流动相：流动相A为0.1mol/L醋酸钠溶液乙酸钠缓冲（pH=6.5）：乙腈（93:7），流动相B为乙腈：水（4:1）。检测条件为0~11min，0%~7%B；11~13.9min，7%~12%；13.9~14min，12%~15%B；14~29min，15%~34%B；29~32min，34%~70%B；32~35min，70%~100%B；35~42min，100%B；42~45min，100~0%B；45~60min，0%B；流速为1.0mL/min；检测波长254nm；柱温40℃；进样量20μL。
流动相A的配制：精密称取三水合醋酸钠13.6g，加入1000mL娃哈哈纯净水，超声搅拌充分溶解后加用冰醋酸或氢氧化钠溶液调pH值至6.50，准确称量好醋酸钠水溶液930mL加色谱级乙腈70mL，混合均匀后，过0.22μm滤膜，作流动相A备用。
对照品溶液的配置及标准曲线的建立
精密称取一定重量的上述17种氨基酸，用纯净水溶解混合均匀，定容至5mL容量瓶中，配制成相应浓度的母液，然后按比例分别加入不同体积的纯净水，配制成一系列浓度的17种氨基酸的对照品溶液，按前文所述的衍生 *** 进行衍生，利用前文所述的色谱条件进行HPLC分析，根据17种氨基酸色谱峰面积，并以此为纵坐标（Y），以氨基酸混标的不同浓度为横坐标（X）分别绘制上述17种氨基酸的标准曲线。
精密度试验
选取前文项下所述的已知含量的供试品溶液，根据前文所述的色谱条件，精密吸取20μL，进行HPLC分析，重复进样6次，以17种氨基酸的峰面积为参考，记录6次HPLC分析的色谱峰面积变化，通过回归方程计算样品中氨基酸含量，并计算RSD值。
重复性试验
选取前文所述的已知含量的供试品溶液，根据前文所述的色谱条件，根据衍生 *** 进行衍生，进行HPLC分析，重复进样6次，以17种氨基酸的峰型和峰面积为依据，观察6次峰面积的变化，通过回归方程计算样品中氨基酸含量，并计算RSD值。
稳定性试验
选取前文所述的已知含量的供试品溶液，保证相同浓度的前提下，分别在0h、2h、4h、6h、8h、12h、24h和48h八个时间段吸取相同体积，按照前文所述的色谱条件进行HPLC分析，以17种氨基酸的峰面积为依据，记录八个时间段的17种氨基酸的峰面积，计算RSD值。加样回收率试验
选取人参不同炮制品前文所述的已知含量的供试品溶液，分为6份，分别根据样品中各个氨基酸含量的20%加入17种氨基酸标品，按照前文所述的色谱条件，进行HPLC分析，计算供试品溶液中17种氨基酸的含量，根据回归方程计算加样回收率以及RSD值。
加样回收率（%）＝（C－A）/B×100%
其中，A表示为供试品所含被测成分的量，B为加入的相应对照品的量，C为实测值。
人参不同炮制品中多糖及还原糖类成分的含量测定
人参不同炮制品中多糖的提取
精密称取5种人参不同炮制品粉末（过80目筛）5.0g，根据1:20的料液比，加入蒸馏水，超声提取2次，60min（温度控制在70~80℃），重复两次，将两次提取液合并过滤，利用BK-RE-1A型旋转蒸发仪进行浓缩，随后加入无水乙醇（3~4倍），使浓缩液中乙醇总浓度高于80%，放置12h后离心，转速控制在4500r/min，5min，然后将离心所得沉淀分别用无水乙醇和丙酮等试剂进行洗涤得到粗多糖。
将上述制得的粗多糖经一定体积蒸馏水溶解后，利用氯仿:正丁醇=4:1的比例除去蛋白质，并按照体积比为1:10加入活性炭，与上清液混合搅拌（40~50min），温度维持在40~45℃下进行过滤，再加入一定体积的无水乙醇，同样使混合溶液乙醇浓度为80%左右，置于低温环境下静置24h，所得沉淀经乙醇和丙酮洗涤三次后，冷冻真空干燥制得精制多糖。
苯酚- *** 法测定人参中多糖的含量
精密称取前文制得的五种人参炮制品的精制多糖各20mg，用蒸馏水溶解，定容至10mL容量瓶中，得到精制多糖供试品溶液（2.0mg/mL）；然后，准确称取D-葡萄糖对照品粉末50mg，经一定体积的蒸馏水进行更大限度的溶解，然后定容至5.0mL容量瓶中，制得浓度为10.0mg/mL的标准品储备液。
采用苯酚-浓 *** 法，按照先前所述的测定 *** ，吸取事先准备好的6%的苯酚溶液1.0mL于50mL三角瓶中，与上述溶液混合均匀，快速加入浓 *** 6.0mL，振荡摇匀，置温度为95℃以上的沸水浴中，10min后快速取出，在冷水环境下冷却3~5min。
随后按上述相同操作，准确称取1mL蒸馏水，在50mL三角瓶中加入1.0mL的苯酚溶液和6.0mL浓 *** ，振荡摇匀，从而制得空白对照品溶液用于调零。利用紫外-可见分光光度计，在485nm波长下记录五种人参炮制品的吸光度，根据葡萄糖标准曲线，计算其含量。
葡萄糖标准曲线的建立及 *** 学考察
精密吸取配制的标准品贮备液0、0.2、0.4、0.6、0.8和1.0mL，加入一定量的蒸馏水，分别配成0、2.0、4.0、6.0、8.0和10.0mg/mL的标准品使用液，分别吸取1.0mL，按照前文所述的苯酚浓 *** 法，在485nm波长下测定吸光度，以葡萄糖质量浓度（mg/mL）为横坐标X，吸光度为纵坐标Y，建立葡萄糖标准曲线；
然后精密吸取标准品和供试品溶液2.0mL，在相同波长下测定吸光度，用于精密度试验，计算RSD值；在不同时间段（0、2、4、8、12和24h）称取标准品和供试品溶液，用于稳定性试验，计算RSD值；精密吸取供试品溶液1.0mL，各加入1.0mL不同浓度的标准品使用液，按照标准曲线制备 *** 测定吸光度，计算平均回收率和RSD值。
回收率=（加样试样测定值-试样测定值）/加标量×100%
人参中多糖溶液衍生
精密称取前文制得的五种人参炮制品多糖样品各20mg，溶于1.0mL蒸馏水中，精密吸取200μL，根据多糖衍生 *** 进行衍生，加入200μL0.5mol/L的PMP（1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮，依达拉奉）溶液，再加入200μL0.3mol/L的NaOH溶液，混合均匀置于70℃水浴加热30min后，冷却至室温后加入200μL0.3mol/L的HCl溶液，再加入200μL的蒸馏水，振荡后，加入1.0mL氯仿萃取3次，取上层溶液过0.22μm滤膜，冷藏备用。
还原糖色谱条件
采用InertsilODS-C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱；流动相为乙腈（A）-0.2mol/L乙酸铵溶液（B），梯度洗脱（0~5min，18.5%A；5min~9min，21.0%A；9min~16min，26.5%A；16min~24min，26.5%~40.0%A；24min~33min，40.0%~60.5%A；35min~40min，60.5%~71.5%A）；流速为1.0mL/min；柱温为30℃；检测波长为250nm；进样量为20μL。
还原糖对照品溶液的制备及标准曲线的建立
精密称取鼠李糖（Rha）；葡萄糖醛酸（GlcA）；麦芽糖（Maltose）；葡萄糖（Glu）；半乳糖（Gal）； *** 糖（Ara）各5.0mg，溶于一定量蒸馏水中，定容5.0mL容量瓶中，配制成1.0mg/mL的标准品溶液，分别吸取0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL，分别按比例加入一定量的蒸馏水，配制成0.2、0.4、0.6、0.8和1.0mg/mL的系列还原糖对照品浓度。
精密度试验
选取前文所述的已知含量的多糖供试品溶液，根据前文所述的色谱条件，按衍生 *** 进行衍生后，精密吸取20μL，进行HPLC分析，重复进样6次，以6种还原糖的色谱峰的峰面积为依据，记录6次HPLC分析的对应峰面积变化情况，根据回归方程，计算多糖溶液中还原糖含量和RSD值。
重复性试验
选取已知含量的多糖供试品溶液，根据前文所述的色谱条件，根据衍生 *** 进行衍生后，进行HPLC分析，重复进样6次，以6种还原糖的峰型和峰面积为依据，观察6次峰面积的变化，根据回归方程，计算多糖溶液中还原糖含量和RSD值。
稳定性试验
选取前文所述的已知含量的多糖供试品溶液，保证相同浓度的前提下，分别间隔0h、2h、4h、6h、8h、12h、24h、48h等时间段吸取相同体积，按照前文所述的色谱条件，衍生后进行HPLC分析，以6种还原糖的峰面积为依据，记录上述8个时间段的相应6种还原糖的峰面积，根据回归方程，计算多糖溶液中还原糖含量和RSD值。
加样回收率试验
选取人参炮制品前文所述的已知含量的多糖供试品溶液，分为6份，分别按比例加入上述6种还原糖对照品，按照前文所述的色谱条件，衍生后进行HPLC分析，计算多糖供试品溶液6种还原糖的含量，根据回归方程计算加样回收率以及RSD值。
加样回收率（%）＝（C－A）/B×100%
其中，A表示为多糖供试品所含被测成分的量，B为加入的相应对照品的量，C为实测值。
参考文献：
<1> 李伟, 王莹, 刘伟. 人参、西洋参非药用部位开发与利用研究进展
<2> 鹿扩建, 曹欢, 笔雪艳, 等. 基于人参炮制历史沿革探讨中国药典中红参炮制规范
<3> Ziaei R, Ghavami A, Ghaedi E, et al. The efficacy of ginseng supplementation on pla *** a lipid concentration in *** s: A systematic review and meta- *** ysis
简介：mannose是一种糖类,在人体代谢过程中,尤其在特定蛋白的糖基化过程中起到重要作用。
mannose物理化学性质：
密度 | 1.6±0.1 g/cm3 |
沸点 | 527.1±50.0 °C at 760 mmHg |
熔点 | 133-140oC |
分子式 | C6H12O6 |
分子量 | 180.156 |
闪点 | 286.7±26.6 °C |
精确质量 | 180.0634 |
PSA | 118.22 |
LogP | -3.17 |
外观性状 | 白色粉末 |
蒸汽压 | 0.0±3.1 mmHg at 25°C |
折射率 | 1.573 |
储存条件 | 应密封干燥保存。 |
稳定性 | 常温常压下稳定，由甲醇中可得α-异构体的结晶，市售商品为端基异构体混合物。有吸湿性。能还原斐林氏溶液。 |
水溶解性 | 每100毫升水中的溶解克数: 248g/20℃ |
分子结构 | 1、 摩尔折射率：37.25 |
2、 摩尔体积（m3/mol）：104.0 | |
3、 等张比容（90.2K）：312.7 | |
4、 表面张力（dyne/cm）：81.7 | |
5、 极化率（10 -24cm 3）：14.76 | |
计算化学 | 1、 疏水参数计算参考值（XlogP）：-2.3 |
2、 氢键供体数量：5 | |
3、 氢键受体数量：6 | |
4、 可旋转化学键数量：1 | |
5、 拓扑分子极性表面积（TPSA）：110 | |
6、 重原子数量：12 | |
7、 表面电荷：0 | |
8、 复杂度：151 | |
9、 同位素原子数量：0 | |
10、 确定原子立构中心数量：5 | |
11、 不确定原子立构中心数量：0 | |
12、 确定化学键立构中心数量：0 | |
13、 不确定化学键立构中心数量：0 | |
14、 共价键单元数量：1 | |
更多 | 1. 性状：白色粉末 |
2. 密度（g/mL,25/4℃）：1.539 | |
3. 相对蒸汽密度（g/mL,空气=1）：未确定 | |
4. 熔点（oC）：133 | |
5. 沸点（oC,常压）：376 | |
6. 沸点（oC,5.2kPa）：未确定 | |
7. 折射率：未确定 | |
8. 闪点（oC）：未确定 | |
9. 比旋光度（o）：14 | |
10. 自燃点或引燃温度（oC）：未确定 | |
11. 蒸气压（kPa,25oC）：未确定 | |
12. 饱和蒸气压（kPa,60oC）：未确定 | |
13. 燃烧热（KJ/mol）：未确定 | |
14. 临界温度（oC）：未确定 | |
15. 临界压力（KPa）：未确定 | |
16. 油水（辛醇/水）分配系数的对数值：-3.25 | |
17. 爆炸上限（%,V/V）：未确定 | |
18. 爆炸下限（%,V/V）：未确定 | |
19. 溶解性：易溶解的 |
mannose详细介绍：
中文名称： | 3458-28-4 |
中文别名： | D-甘露糖;D-(+)-甘露糖;D(+)-麦芽糖;D-甘露糖 D-MANNOSE;D-甘露糖(标准品);D-甘露糖(植物);D-甘露糖(植提);甘露糖;D-( )-甘露糖;D-(+)-Mannose D-(+)-甘露糖;D(+)甘露糖;D(+)-甘露糖;D(+)-甘露糖 标准品;D-(+)-甘露糖,D-(+)-Mannose;D-(+)-五水棉子糖;D-Mannose D-甘露糖;D-甘露糖 标准品;D-甘露糖,BR;D-甘露糖醇;低聚甘露糖醇;甘露醇;甘露糖 USP标准品;他克莫司;D-吡喃甘露糖;D-甘露糖,D-Mannose,分析标准品;D-甘露糖,医药级,纯度:>99% |
英文名称： | D-Mannose |
英文别名： | (2S,3S,4R,5R)-2,3,4,5,6-Pentahydroxyhex *** ;CARUBINOSE;D-MANNOPYRANOSE;D-(+)-MANNOSE;D-MANNOSE;D-MAN;MANNOSE, D-(+)-;SEMINOSE;d-mannos;D(+)-Mannose;MANNOSE, D-(+)-(RG);MANNOSE, D-(+)-(RG) PrintBack;Carubinose;Mannose;Mannose, d- |
CAS号： | 3458-28-4
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分子式： | C6H12O6 |
分子量： | 180.16 |
详细描述 | 3458-28-4，mannose，上海现货。 Medlife，致力于提供高品质、高性价比小分子化合物的产品。 Medlife小分子化合物大量库存，提供超过2万种的抑制剂、激动剂、拮抗剂等产品，是药物及疾病研究的重要原料供应商。 D-Mannose 是一种糖类，在人体代谢过程中，尤其在特定蛋白的糖基化过程中起到重要作用。 查询关键词:“3458-28-4，mannose,PC19287，上海现货”。 |
mannose参考文献：
<1>. Genovese C, et al. Effects of a new combination of plant extracts plus d-mannose for the management of uncomplicated recurrent urinary tract infections. J Chemother. 2018 Apr;30(2):107-114.
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